RSR AQP4Ab試劑盒(如RSR AQP4 Ab ELISA V2)是一種用于定量檢測人血清中水通道蛋白4自身抗體(AQP4 Ab)的工具，主要用于輔助診斷視神經脊髓炎(NMO)及相關疾病譜(NMOSD)。以下是其測定步驟：
 

　　1.樣本準備：采集患者的血清、腦脊液或其他相關液體樣本作為檢測材料。確保樣本采集過程符合標準操作規(guī)程，避免污染和溶血等情況影響檢測結果。
 

　　2.加樣與反應
 

　　-加入標準品/質控品：在微孔板上相應的位置加入已知濃度的標準品或質控樣品，用于建立標準曲線和監(jiān)控實驗的準確性。
 

　　-加入待測樣本：將處理好的待測樣本依次加入到指定的微孔中。
 

　　-添加AQP4-生物素：向各孔中加入溶解后的AQP4-生物素標記物，使待測樣本中的抗體(AQP4 Ab)可同時與包被在微孔中的抗原(AQP4)和生物素標記的抗原結合。
 

　　3.孵育與洗滌
 

　　-室溫震蕩孵育：在室溫下進行一定時間的震蕩孵育，通常為兩小時左右，以保證抗原抗體充分反應。
 

　　-洗板：孵育結束后，使用適當?shù)木彌_液清洗微孔板，去除未結合的物質，以減少背景干擾。
 

　　4.顯色反應：按照說明書的要求加入相應的酶標試劑和其他必要的成分，引發(fā)顯色反應。通過酶聯(lián)作用使底物轉化為有色產物，顏色的深淺與樣本中AQP4 Ab的濃度成正比。
 

　　5.測定吸光度：使用酶標儀在特定波長(如405nm、450nm)下測定各孔的吸光度值。根據(jù)標準曲線計算出待測樣本中AQP4 Ab的濃度。
 

　　RSR AQP4Ab試劑盒的基本工作原理：
 

　　1.雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：該試劑盒應用了雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗技術。具體來說，用純化的人水通道蛋白4(AQP4)抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中依次加入含有AQP4Ab的水通道蛋白樣本。如果樣本中含有目標抗體，則會與固相上的抗體結合形成復合物。再通過加入標記有辣根過氧化物酶(HRP)的檢測抗體，使其進一步與已結合在固相上的抗原-抗體復合物反應，通過顯色反應來定量測定樣本中的AQP4Ab水平。
 

　　2.特異性識別與結合：由于使用了針對特定抗原(即水通道蛋白4)的高度特異性抗體作為捕獲和檢測工具，因此能夠確保只有與目標分子相關的免疫反應被記錄下來，從而提高了檢測的準確性和可靠性。